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用高倍顯微鏡觀察葉綠體和線粒體


2．材料的選取
(1)常用蘚類葉片（或是菠菜葉稍帶些葉肉的下表皮）。
(2)原因： ①蘚類葉片僅有一層葉肉細(xì)胞。 ②菠菜葉接近下表皮的葉肉細(xì)胞是海綿組織，細(xì)胞排列疏松，細(xì)胞分散，易撕取，便于觀察。
3．實(shí)驗(yàn)流程
(1)觀察葉綠體



知識點(diǎn)撥：

1、制作蘚葉臨時(shí)裝片觀察葉綠體時(shí)，要保持葉片有水狀態(tài)，若葉綠體失水，就會(huì)縮成一團(tuán)，將無法觀察。2、制作觀察線粒體的臨時(shí)裝片時(shí)，是滴一滴健那綠染液于載玻片中央用于染色，而不是滴一滴生理鹽水。3、觀察線粒體一般選用動(dòng)物或人體細(xì)胞，而不選取植物細(xì)胞，其原因是經(jīng)健那綠染色的線粒體顏色為藍(lán)綠色，與葉綠體顏色相近，會(huì)影響對線粒體的觀察。

知識拓展：

1、葉綠體和線粒體的分布：對于植物葉片，上表皮葉綠體分布較多，便于吸收光照進(jìn)行光合作用。線粒體在細(xì)胞中的分布是不均勻的，代謝旺盛的部位，線粒體較多。
2、葉綠體在細(xì)胞內(nèi)可隨細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)而流動(dòng)，同時(shí)受光照強(qiáng)度的影響。葉綠體在弱光下以最大面積朝向光源；強(qiáng)光下則以側(cè)面或頂面朝向光源。實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)可適當(dāng)調(diào)整光照強(qiáng)度和方向以便于觀察。
例下列關(guān)于“用高倍顯微鏡觀察葉綠體和線粒體”的實(shí)驗(yàn)說法不正確的是( )
A．健那綠染液是一種活細(xì)胞染料，幾乎不損傷細(xì)胞
B．離倍顯微鏡下，可看到綠色、扁平的橢球形或球形的葉綠體
C．健那綠染液可將細(xì)胞質(zhì)染成藍(lán)綠色
D．蘚類葉片可直接放在載玻片上觀察葉綠體
答案C


相關(guān)高中生物知識點(diǎn)：月季的花藥培養(yǎng)

月季的花藥培養(yǎng)：

1、被子植物的花粉發(fā)育
（1）被子植物的雄蕊通常包含花絲、花藥兩部分。花藥為囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)部含有許多花粉。
（2）花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小包子四分體時(shí)期、單核期和雙核期等階段。


2、產(chǎn)生劃分植株的兩種途徑：一種是花粉通過胚狀體階段發(fā)育為植株，另一種是花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再將其誘導(dǎo)分化成植株。

兩種途徑之間沒有絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。

3、影響花藥培養(yǎng)的因素：
（1）材料的選擇：一般來說，在單核期（通常是完全未開放的花蕾），細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥成功率最高。
（2）培養(yǎng)基的選擇。
（3）此外，親本植株的生長條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種密度等對誘導(dǎo)成功率又一定影響。
4、材料選取方法：醋酸洋紅法和焙花青-鉻礬法
5、步驟：
材料的選取→材料的消毒→接種和培養(yǎng)→結(jié)果分析與評價(jià)



知識點(diǎn)撥：

1、材料的選擇要是選擇單核期以前的花藥接種，質(zhì)地幼嫩，極易破碎；選擇單核期以后的花藥接種，花瓣已有些松動(dòng)，又給材料的消毒帶來困難，通常不選擇盛開或略微開放的花。
2、選擇月季花粉的最佳時(shí)期為完全未開放的花蕾。材料的選擇是花粉植株能否培養(yǎng)成功的主要影響因素之一，不同植物及同一植物的不同生理狀況誘導(dǎo)成功率都不相同。
3、選擇花藥時(shí)，確定花藥發(fā)育時(shí)期最常用的方法是醋酸洋紅法。某些植物的花粉不易著色需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色。
4、材料的消毒過程：
花蕾用體積分?jǐn)?shù)為70％的酒精浸泡30s→無菌水沖洗→吸干表面的水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1％的氯化汞溶液中2～4min→無菌水再?zèng)_洗3～5次。
5、接種和培養(yǎng)過程中注意的情況
在無菌條件下剝離花藥時(shí)要盡量不損傷花藥（否則接種后容易從受傷部位產(chǎn)生愈傷組織），同時(shí)還要徹底除去花絲。因?yàn)榛ńz的存在不利于愈傷組織或胚狀體的形成。


相關(guān)高中生物知識點(diǎn)：多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段

多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增DNA片段：

1、PCR原理：在解旋酶作用下，打開DNA雙鏈，每條DNA單鏈作為母鏈，以4中游離脫氧核苷酸為原料，合成子鏈，在引物作用下，DNA聚合酶從引物3'端開始延伸DNA鏈，即DNA的合成方向是從子鏈的5'端自3'端延伸的。實(shí)際上就是在體外模擬細(xì)胞內(nèi)DNA的復(fù)制過程。DNA的復(fù)制需要引物，其主要原因是DNA聚合酶只能從3′端延伸DNA鏈。
2、PCR反應(yīng)過程是：變性→復(fù)性→延伸

過程	說明	圖解
變性	當(dāng)溫度上升到90℃以上時(shí)，雙鏈DNA解聚為單鏈
復(fù)性	溫度下降到50℃左右，兩種引物通過堿基互補(bǔ)配對與兩條單鏈DNA結(jié)合
延伸	72℃左右時(shí)，TaqDNA聚合酶有最大活性，可使DNA新鏈由5'端向3'端延伸

3、結(jié)果：上述三步反應(yīng)完成后，一個(gè)DNA分子就變成了兩個(gè)DNA分子，隨著重復(fù)次數(shù)的增多，DNA分子就以2ⁿ的形式增加。PCR的反應(yīng)過程都是在PCR擴(kuò)增儀中完成的。



細(xì)胞被DNA復(fù)制與PCR技術(shù)的比較：

		細(xì)胞內(nèi)DNA復(fù)制	體外DNA擴(kuò)增（PCR）
不同點(diǎn)	解旋	在解旋酶作用下邊解旋邊復(fù)制	80～100℃高溫解旋，雙鏈完全分開
	酶	DNA解旋酶、DNA聚合酶	TaqDNA聚合酶
	引物	RNA	DNA、RNA
	溫度	體內(nèi)溫和條件	高溫
相同點(diǎn)		①需提供DNA模板 ②四種脫氧核苷酸為原料 ③子鏈延伸的方向都是從5'端到3'端

知識點(diǎn)撥：

1、DNA分子復(fù)制的人工控制
解開螺旋：在80～100℃時(shí)，DNA雙螺旋打開，形成兩條DNA單鏈，稱為變性。
恢復(fù)螺旋：在50～60℃左右時(shí)，兩條DNA單鏈重新形成雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱為復(fù)性。
復(fù)制條件：緩沖液，DNA模板、四種脫氧核苷酸、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、兩種引物。
控制儀器：PCR儀（溫度周期性自動(dòng)調(diào)節(jié)儀）。
2、PCR的含義是多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。
3、PCR技術(shù)反應(yīng)的條件：①穩(wěn)定的緩沖溶液環(huán)境；②DNA模板；③合成引物；④四種脫氧核甘酸；⑤DNA聚合酶；⑥溫控設(shè)備
4、PCR技術(shù)最突出的優(yōu)點(diǎn)是快速、高效、靈活、易于操作。
5、TaqDNA聚合酶的特點(diǎn)是：耐高溫。

知識拓展：

1、DNA含量的測定——分光光度法

項(xiàng)目		說明
原理		DNA在260nm的紫外線波段有一強(qiáng)烈吸收峰，峰值大小與DNA的含量是正相關(guān)
過程	稀釋	2μLPCR反應(yīng)液，加入98μL蒸餾水，即將樣品進(jìn)行50倍稀釋
	對照調(diào)零	以蒸餾水作為空白對照，在波長260nm處，將紫外分光光度計(jì)的賭注調(diào)節(jié)至零
	測量	取DNA稀釋液100μL至比色杯中，測定260nm處的光吸收值
	計(jì)算	DNA含量（μg/mL）=50×（260nm的讀數(shù)）×稀釋倍數(shù)

2、DNA聚合酶不恩能夠從頭合成DNA，只能從DNA的3'端開始延伸DNA鏈，因此DNA復(fù)制需要引物。


相關(guān)高中生物知識點(diǎn)：單克隆抗體

單克隆抗體：

1、抗體：一個(gè)B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體。從血清中分離出的抗體產(chǎn)量低、純度低、特異性差。
2、單克隆抗體的制備
（1）制備產(chǎn)生特異性抗體的B淋巴細(xì)胞：向免疫小鼠體內(nèi)注射特定的抗原，然后從小鼠脾內(nèi)獲得相應(yīng)的B淋巴細(xì)胞
（2）獲得雜交瘤細(xì)胞
①將鼠的骨髓瘤細(xì)胞與脾細(xì)胞中形成的B淋巴細(xì)胞融合；
②用特定的選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細(xì)胞，該雜種細(xì)胞既能夠增殖又能產(chǎn)生抗體。
（3）克隆化培養(yǎng)和抗體檢測
（4）將雜交瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)或注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖
（5）提取單克隆抗體：從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠的腹水中提取
3、單克隆抗體的應(yīng)用
(1)作為診斷試劑，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。
(2)用于治療疾病和運(yùn)載藥物。



血清抗體與單克隆抗體的比較：

名稱	產(chǎn)生	特點(diǎn)
血清抗體	由B淋巴	一般從血清中分離，產(chǎn)量低、純度低、特異性差
單克隆抗體	由雜交瘤細(xì)胞分泌	特異性強(qiáng)，靈敏度高，能大量制備

知識點(diǎn)撥：

1、融合的結(jié)果是有很多不符合要求的；如有2個(gè)B淋巴細(xì)胞融合的細(xì)胞等，所以要進(jìn)行篩選。
2、篩選出能夠分泌所需抗體的雜種細(xì)胞。
3、雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。
4、單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。
5、單克隆抗體的作用：作為診斷試劑：準(zhǔn)確識別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異，并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，具有準(zhǔn)確、高效、簡易、快速的優(yōu)點(diǎn)。用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于治療癌癥治療，可制成“生物導(dǎo)彈”，也有少量用于治療其它疾病。

知識拓展：

制備單克隆抗體過程中的篩選：篩選是將未融合的B淋巴細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞以及BB融合、瘤瘤融合的細(xì)胞通過選擇培養(yǎng)基淘汰，篩選出B瘤融合的細(xì)胞。篩選是將產(chǎn)生特定抗體的B瘤細(xì)胞通過細(xì)胞培養(yǎng)用相應(yīng)抗原檢測的辦法篩選出來。因?yàn)閺捏w內(nèi)取免疫過的B淋巴細(xì)胞時(shí)取出很多種，形成的雜交瘤細(xì)胞有很多種，所以需篩選出產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細(xì)胞。


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